Identificazione ed enumerazione delle cellule immunitarie nel liquido di lavaggio broncoalveolare mediante citometria a flusso

Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente liquido di lavaggio broncoalveolare di topo comprendente una popolazione di cellule immunitarie colorata con un colorante vitale fluorescente verde.

Introdurre anticorpi Fc per bloccare i recettori Fc delle cellule immunitarie.

Aggiungi un cocktail di anticorpi distinti marcati con fluorofori mirati a specifici marcatori cellulari. Rimuovere gli anticorpi non legati e risospendere le cellule in un tampone.

Utilizzando la citometria a flusso, identificare i singoletti di fluorescenza deboli, indicando le cellule vive.

Illuminare le cellule a 488 nanometri, facendo sì che le cellule emettano fluorescenza rossa correlata alle cellule che esprimono CD11c.

All'interno della popolazione ad alto contenuto di CD11c, con opportuni filtri di lunghezza d'onda, identificare le proteine marcatrici cellulari MHC-II sulle cellule dendritiche e SiglecF sui macrofagi.

Nella popolazione CD11c bassa, l'espressione di CD3 sulle cellule T e CD19 sulle cellule B ne consente l'identificazione.

Illuminare le cellule a 405 nanometri, emettendo fluorescenza blu, che indica i neutrofili che esprimono CD11b.

L'illuminazione delle cellule a 633 nanometri eccit