JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 6:08 min. • July 8th, 2025
Prendi una piastra a più pozzetti contenente micobatteri. Aggiungere concentrazioni crescenti di composti in esame ai pozzetti.
incubare. A seconda dell'azione del composto sui micobatteri, può inibire la crescita dei micobatteri, mostrando un'attività batteriostatica, o eliminare i micobatteri, dimostrando attività battericida.
Trasferire le aliquote dei pozzetti in un saggio di agar resazurina al carbone, o CARA, per micropiastra contenente agar con carbone attivo per assorbire il composto in esame, prevenendo gli effetti del carryover.
incubare. L'attività batteriostatica del composto inibisce la replicazione micobatterica, mentre l'attività battericida riduce la vitalità micobatterica.
Aggiungere tampone, resazurina e un tensioattivo non ionico per disperdere la resazurina nei pozzetti.
Nei micobatteri metabolicamente attivi, le deidrogenasi riducono la resorufina di colore blu, debolmente fluorescente, a una resorufina rosa fluorescente.
Utilizzando un lettore di micropiastre, misurare la fluorescenza della resorufina nei pozzetti.
I pozzetti privi di fluorescenza della resorufina indicano l'attività battericida del composto.
La variazione dell'intensità della fluorescenza tra
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