JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:14 min. • July 8th, 2025
Prendi una piastra multipozzetto contenente un modello consolidato di Mycobacterium tuberculosis o infezione da Mtb.
I pozzetti contengono aggregati cellulari che comprendono un nucleo di macrofagi necrotici densamente impacchettati e infettati da Mtb, circondati da macrofagi non infetti, imitando l'infezione in vivo.
Prendi una diluizione seriale degli antibiotici rifampicina e moxifloxacina.
Scartare i terreni dalla piastra di infezione, trasferire le diluizioni antibiotiche nei pozzetti e incubare.
Gli antibiotici si diffondono attraverso gli aggregati cellulari ed entrano nelle cellule batteriche.
La rifampicina lega l'RNA polimerasi batterica, inibendo la sintesi dell'RNA e causando la morte batterica.
La moxifloxacina lega la DNA topoisomerasi batterica, inibendo la replicazione e arrestando la crescita batterica. Il legame induce anche risposte allo stress, compreso l'accumulo di specie reattive dell'ossigeno, uccidendo i batteri.
Dopo l'incubazione, aggiungere la resazurina, un indicatore redox. All'interno di batteri viventi e metabolicamente attivi, l'enzima ossidoreduttasi riduce la resoraurina blu in resorufina fluorescente rosa.
Misura la fluorescenza per rilevare i ba
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