Un test in vitro per esaminare il potenziamento anticorpo-dipendente dell'infezione virale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:35 min. • July 8th, 2025
Prelevare una micropiastra con diluizioni seriali di un campione di siero contenente anticorpi contro il virus Zika.
Aggiungere particelle di virus reporter Dengue o RVP e incubare.
Gli RVP ingegnerizzati comprendono un involucro con proteine strutturali e un nucleocapside contenente RNA genomico, che codifica per una proteina fluorescente.
L'omologia strutturale delle proteine dell'involucro dei virus Dengue e Zika fa sì che gli anticorpi reagiscano in modo incrociato con gli RVP, formando un complesso.
Aggiungere cellule leucemiche umane inammissibili all'infezione da RVP.
Le cellule possiedono recettori Fc che riconoscono gli anticorpi legati a RVP, facilitando l'ingresso degli RVP all'interno degli endosomi, chiamato potenziamento anticorpo-dipendente o ADE.
Pellettare le cellule e scartare il surnatante contenente RVP non internalizzati. Aggiungere un terreno di coltura e incubare.
La fusione pH-dipendente di RVP e membrane endosomiali rilascia il nucleocapside, che si disassembla per rilasciare RNA genomico, consentendo l'espressione della proteina fluorescente.
Fissare le cellule e analizzarle utilizzando la citometria a flusso.
Una fluorescenza più elevata a una concentrazi
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