JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:53 min. • July 8th, 2025
Prendere una piastra multipozzetto con diversi macrofagi reporter che ospitano il gene secreto della fosfatasi alcalina embrionale, o SEAP, o un gene della luciferasi secreta sotto promotori inducibili.
Aggiungere terreni contenenti diversi ibridi di nanoparticelle peptidico-oro mescolati con lipopolisaccaridi o LPS ai pozzetti designati.
L'LPS si lega ai recettori toll-like dei macrofagi, o TLR, innescando l'internalizzazione nell'endosoma.
La pompa protonica endosomiale trasporta i protoni all'interno. L'acidificazione innesca la segnalazione dei TLR, attivando i fattori di trascrizione.
Questi fattori inducono l'espressione dei geni reporter, producendo SEAP o luciferasi.
In alternativa, l'internalizzazione dell'LPS insieme agli ibridi fa sì che i gruppi peptidici caricati negativamente sequestrino i protoni luminali, prevenendo l'acidificazione endosomiale e inibendo la segnalazione dei TLR.
Raccogliere il terreno, centrifugare per separare il surnatante e aggiungere i substrati per SEAP e luciferasi.
SEAP converte il suo substrato in un prodotto colorato, mentre la luciferasi catalizza il suo substrato per produrre luminescenza.
Una riduzione dei segnali reporter indica l'effi
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