JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 6:23 min. • July 8th, 2025
Prelevare una piastra multipozzetto contenente un monostrato di cellule di mammifero.
Inoculare i pozzetti con diluizioni seriali di omogeneizzati tissutali contenenti il virus Zika, derivati da diversi organi di un topo infetto.
Al momento dell'ingresso nelle cellule attraverso l'endocitosi, il virus si moltiplica e si allontana per infettare le cellule vicine.
Sovrapporre con una soluzione di metilcellulosa ad alta viscosità, creando una barriera fisica che limita il movimento del virus.
La barriera consente solo l'infezione delle cellule immediatamente vicine, formando focolai di cellule infette, e garantisce che ogni focolaio provenga da una singola particella virale, consentendo una quantificazione accurata.
Fissare le cellule e permeabilizzare la membrana. Aggiungere anticorpi primari che entrano nelle cellule e interagiscono con l'antigene virale.
Introdurre un anticorpo secondario coniugato con perossidasi che si lega all'anticorpo primario.
Aggiungi un substrato cromogenico che viene convertito dalla perossidasi per creare macchie colorate, indicando i focolai delle cellule infette.
Contare i focolai per quantificare il titolo virale nei diversi organi del topo.
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