Valutazione del potenziale antimicrobico degli isolati batterici fecali murini produttori di batteriocina

0 visualizzazioni2:49 min • July 8th, 2025

Prendere una sospensione fecale di topo composta da batteri lattici, o LAB, che producono batteriocina, un peptide antimicrobico, e inoculare in un terreno di agar morbido selettivo LAB preriscaldato.

Versare il terreno in una piastra di agar, formando il primo strato.

Sovrapporre un secondo strato di agar e incubare.

Il primo strato promuove selettivamente la crescita del LAB, consentendo alle molecole di batteriocina secrete di diffondersi verso l'esterno dalle colonie nel mezzo circostante.

Il secondo strato contiene un terreno privo di cellule che consente la diffusione della batteriocina e impedisce la crescita di colonie di LAB sulla superficie.

Ora, versare un terzo strato di agar contenente un ceppo sensibile alla batteriocina.

I batteri che crescono nel terzo strato incontrano la batteriocina che si diffonde dagli strati inferiori.

La batteriocina distrugge la membrana cellulare dei batteri sensibili, disturbando l'omeostasi cellulare e provocando la morte cellulare, visibile come una zona chiara sul terzo strato.

Misurare il diametro della zona per valutare la potenza della batteriocina.

Per contare le cellule batteriche produttrici di batteriocina nei campioni fecali, trasferire le cellule diluite del produttore di batteriocina a 4 millilitri di agar morbido MRS preriscaldato. Mescolare l'agar a vortice e versare le cellule su una piastra di agar MRS 1,5%. Questo livello è indicato come primo strato.

Trasferire altri 4 millilitri di agar morbido MRS allo 0,8% senza cellule sul primo strato per incorporare tutte le cellule all'interno dell'agar morbido. Questo strato ha lo scopo di impedire alle cellule di crescere come colonie sulla superficie delle piastre di agar.

Nella cappa sterile, asciugare le piastre togliendo il coperchio per cinque-10 minuti prima di incubare le piastre a 30 gradi Celsius per 20-24 ore per la crescita cellulare e la formazione di colonie.

Per identificare le colonie produttrici di batteriocina, mescolare 40 microlitri di una coltura notturna di un ceppo indicatore appropriato con 4 millilitri di agar morbido preriscaldato per ciascuna piastra. Versare il composto nei piatti. Questo strato è indicato come il terzo strato.

Asciugare e incubare le piastre come prima, per la crescita cellulare e la formazione di colonie. Le colonie produttrici di batteriocina hanno chiare zone di inibizione intorno alle colonie.

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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026