JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:29 min. • July 8th, 2025
Prelevare due micropiastre contenenti vetrini coprioggetti con macrofagi derivati dal midollo osseo o BMM.
Aggiungete i promastigoti metaciclici di Leishmania – lo stadio flagellato allungato – in una piastra e gli amastigoti – lo stadio ovale non flagellato – in un'altra piastra.
Durante l'incubazione, i parassiti si legano ai recettori dei macrofagi, innescando la fagocitosi mediata dal recettore.
Il fagosoma si fonde con i lisosomi e le vescicole derivate dal reticolo endoplasmatico e dall'apparato di Golgi, maturando in un vacuolo parassitoforo.
La diminuzione del pH del vacuolo innesca la differenziazione del promastigote in amastigote e la sua replicazione.
Lavare per rimuovere i parassiti non internalizzati.
Fissare i macrofagi infetti e aggiungere un detergente per permeabilizzare le cellule e i parassiti.
Introdurre un colorante fluorescente di acido nucleico per colorare i nuclei dei macrofagi e dei parassiti.
Monta i vetrini coprioggetti su vetrini e osserva al microscopio a fluorescenza, quantificando i nuclei ospiti più grandi e i nuclei di amastigote più piccoli circostanti.
Confrontare il numero di amastigoti per valutare la loro moltiplicazione all'interno dei macro
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