JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:34 min. • July 8th, 2025
Prendi una micropiastra contenente cellule di mammifero su ghiaccio.
Aggiungere un terreno contenente calcio ai pozzetti selezionati e un terreno senza calcio agli altri.
Introdurre monomeri di una tossina batterica che forma i pori. Una bassa temperatura impedisce l'aggregazione dei monomeri, facilitando il legame con il colesterolo della membrana cellulare.
Incubare a una temperatura fisiologica, permettendo ai monomeri legati al colesterolo di oligomerizzarsi e inserirsi nella membrana, formando un poro.
Nei pozzetti con calcio extracellulare, il poro provoca l'afflusso di calcio.
L'afflusso innesca la fuoriuscita esosomiale della tossina e la richiusura della membrana.
L'aumento intracellulare del calcio induce anche l'esocitosi lisosomiale, rilasciando un enzima che converte la sfingomielina della membrana in ceramide.
La membrana arricchita di ceramidi innesca l'endocitosi della tossina, risigillando la membrana.
La risigillatura della membrana è ostacolata in pozzetti privi di calcio extracellulare.
Aggiungere ioduro di propidio o PI – un colorante fluorescente – che non può entrare nelle cellule con una membrana riparata ma entra nelle cellule danneggiate per legare il DNA,
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