Una colorazione immunoistochimica per la rilevazione degli antigeni del virus della rabbia

Inizia con un vetrino che trasporta una sezione di tessuto cerebrale di topo infetta dal virus della rabbia fissata in formalina e inclusa in paraffina. La sezione fissa trattiene gli antigeni virali tramite reticolazione delle proteine.

Trattare il vetrino con una soluzione di xilene per rimuovere la paraffina.

Immergere il vetrino in concentrazioni decrescenti di etanolo per reidratare il tessuto, rendendolo compatibile con le soluzioni acquose.

Introdurre un tampone contenente proteasi per interrompere i legami incrociati delle proteine, migliorando l'accessibilità dell'antigene.

Immergere nel perossido di idrogeno per bloccare le perossidasi endogene e applicare una soluzione bloccante per prevenire interazioni non specifiche.

Introdurre anticorpi primari specifici per l'antigene della rabbia, formando complessi antigene-anticorpo.

Aggiungere anticorpi secondari biotinilati, che si legano agli anticorpi primari. Incubare con gli enzimi perossidasi coniugati con streptavidina, che interagiscono con la biotina.

Introdurre un substrato di perossidasi, producendo un precipitato rosso magenta.

Controcolorare il tessuto con una colorazione nucleare, seguita da un agente azzurrante, c