Immunoistochimica per studiare la relazione tra macrofagi e cellule immunitarie infiltrate

Iniziare con un vetrino contenente sezioni di biopsia dell'arteria temporale fissate in formalina, deparaffinizzate e reidratate con cellule immunitarie infiltrate, inclusi linfociti e macrofagi.

I macrofagi attivati esprimono il recettore beta dei folati o FR-β, un marcatore correlato alla malattia, che differenzia i macrofagi dalle altre cellule immunitarie.

Trasferire il vetrino in un tampone preriscaldato per recuperare i recettori di superficie.

Trattare la sezione con perossido di idrogeno, bloccando l'attività della perossidasi intracellulare.

Introdurre un mix di anticorpi primari che hanno come bersaglio CD3, CD68 e FR-β, che si legano alle cellule immunitarie che esprimono queste proteine.

Aggiungere gli anticorpi secondari biotinilati, che interagiscono con gli anticorpi primari, e lavare.

Sovrapporre con enzimi coniugati con streptavidina che si legano alla biotina.

Trattare con un substrato cromogenico che interagisce con gli enzimi, producendo precipitati marroni localizzati.

Introdurre un colorante di contrasto, l'ematossilina, che colora i nuclei di blu.

Identificare al microscopio le cellule piccole, rotonde, colorate di marrone come linfociti che esprimono CD3 e l