Un test per l'analisi del ciclo cellulare delle cellule T CD8+ antigene-specifiche
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 6:20 min. • July 8th, 2025
Prelevare cellule di organi linfoidi secondari da un topo immunizzato con l'antigene, contenenti cellule T CD8+ antigene-specifiche in diversi stadi del ciclo cellulare.
G1, S, G2 e M sono stadi di cellule in divisione attiva, mentre le cellule nello stadio G0 sono quiescenti.
Aggiungere un colorante fluorescente per marcare le cellule morte e anticorpi marcati con fluorofori che si legano ai marcatori di superficie delle cellule T CD3 e CD8.
Introdurre i multimeri peptidi-MHC antigenici coniugati con fluorofori per legare i recettori delle cellule T, marcando le cellule T antigene-specifiche.
Utilizzando un tampone, fissare e permeabilizzare le cellule.
Introdurre anticorpi marcati con fluorofori per legare una proteina nucleare associata alla proliferazione cellulare, colorando le cellule che si dividono attivamente.
Aggiungi una colorazione fluorescente per etichettare il DNA.
Utilizzando la citometria a flusso, selezionare le cellule viventi e identificare le cellule T CD8+ antigene-specifiche tramite le etichette legate alla superficie.
L'intensità della colorazione del DNA discrimina le cellule G0 e G1 con una quantità di DNA inferiore dalle cellule S, G2 e M con una quantità
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