Misurazione dell'assorbimento microgliale di particelle fluorescenti erogate per via intravitreale mediante citometria a flusso

Inizia con una piastra a più pozzetti contenente una sospensione unicellulare di cellule mieloidi retiniche di topo, tra cui microglia, monociti e neutrofili.

Le microglia, o cellule immunitarie fagocitiche retiniche, mostrano fluorescenza a causa di bioparticelle di origine fungina inghiottite marcate con fluoroforo, preiniettate per via intravitrea.

Centrifugare e aggiungere anticorpi del recettore Fc, bloccando i siti di interazione non specifici."

Introdurre un cocktail di anticorpi marcati con fluorofori che hanno come bersaglio le proteine di superficie CD11b, Ly6C e Ly6G, interagendo con le cellule mieloidi che le esprimono.

Rimuovere gli anticorpi non legati. Trattare con ioduro di propidio, che permea attraverso le membrane danneggiate, colorando esclusivamente le cellule morte.

Nella citometria a flusso, eccitare lo ioduro di propidio per escludere le cellule morte e identificare le cellule vive non fluorescenti.

Illuminare le cellule con un laser viola; le cellule vive eccitate indicano le cellule mieloidi che esprimono CD11b.

Successivamente, illuminare con un laser rosso, eccitando il fluoroforo rosso vicino lontano all'interno delle cellule CD11b-positive, indicando i