Un test di citometria a flusso per identificare sottogruppi di cellule immunitarie nelle cellule mononucleate del sangue periferico

Prendiamo le cellule mononucleate del sangue periferico o PBMC, una popolazione di cellule miste che comprende linfociti e monociti.

Aggiungi un colorante fluorescente per discriminare le cellule morte e un cocktail di anticorpi marcati in fluorescenza per identificare diversi tipi di cellule.

Gli anticorpi coniugati con fluorocromo A si legano ai marcatori di superficie: CD3 sulle cellule T, recettore delle cellule T γδ o TCR sulle cellule T γδ e CD56 sulle cellule natural killer o NK.

Gli anticorpi coniugati con fluorocromo B si legano a CD4 e CD8 sulle cellule T, CD19 sulle cellule B e CD14 sui monociti.

Utilizzando la citometria a flusso, identificare i sottogruppi di cellule vive.

Mentre le cellule T CD8⁺ e CD4⁺ sono CD3⁺, le cellule CD4⁺ si trovano tra le cellule CD3 single-positive e le cellule CD3-CD8 double-positive.

Le cellule T γδ esprimono γδ TCR e CD3 più elevati rispetto alle cellule CD4⁺ e CD8⁺.

Le cellule B e le cellule NK sono CD3^- ma sono identificate dal CD19 sulle cellule B e dal CD56 sulle cellule NK.

I monociti sono identificati dall'espressione di CD14.

Per preparare i PBMC per la colorazione, trasferire 100 microlitri di ciascun campione in una piastra con f