Un test basato su CFSE per monitorare la migrazione delle cellule dendritiche cutanee verso i linfonodi drenanti nei topi infetti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:34 min. • July 8th, 2025
Prendi un topo anestetizzato. Iniettare la sospensione di Mycobacterium bovis BCG nel cuscinetto posteriore.
Le cellule dendritiche cutanee riconoscono e fagocitano i micobatteri.
Inoltre, i componenti micobatterici processati sono presentati su molecole MHC di classe II.
Iniettare il colorante CFSE permeabile alle cellule nello stesso piede.
Le esterasi intracellulari scindono il CFSE in un prodotto fluorescente impermeabile alle cellule, colorando le cellule.
Inoltre, le cellule dendritiche attivate migrano attraverso i vasi linfatici fino al linfonodo popliteo, attivando le cellule T.
Asportare chirurgicamente il linfonodo popliteo e omogeneizzarlo attraverso un colino, ottenendo una sospensione unicellulare.
Centrifugare e risospendere le cellule in un tampone.
Trasferire le cellule in una provetta per citometria a flusso. Centrifugare e trattare le cellule con un cocktail di anticorpi.
Gli anticorpi che bloccano le fc bloccano i recettori Fc, mentre gli anticorpi marcati con fluorofori si legano ai marcatori di superficie CD11c e alle molecole MHC di classe II sulle cellule immunitarie.
Utilizzando la citometria a flusso, identificare le cellule dendritiche cutanee marcate con
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici