JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:22 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra di imaging a base di vetro contenente una sospensione di neutrofili umani o cellule immunitarie e visualizzala sotto un sistema di imaging a fluorescenza.
Introduci conidi reporter fluorescenti geneticamente modificati di Aspergillus o spore fungine e acquisisci immagini a intervalli regolari fino a 6 ore.
Le spore fungine esprimono proteine fluorescenti rosse e sono marcate esternamente con fluorofori magenta non degradabili, aiutando a distinguere le cellule morte da quelle vive.
Durante l'incubazione, i neutrofili interagiscono con le molecole associate ai patogeni sui conidi attraverso i recettori di riconoscimento dei modelli, facilitando il loro inghiottimento all'interno di un fagosoma.
Successivamente, il fagosoma si fonde con il lisosoma contenente l'enzima, formando un fagolisosoma.
All'interno del fagolisosoma, le specie reattive dell'ossigeno e gli enzimi degradano i conidi.
Durante l'imaging di cellule vive, al punto temporale iniziale, la fluorescenza rossa e magenta intensa all'interno del fagosoma dei neutrofili indica la presenza di conidi vivi.
Nel tempo, una diminuzione della fluorescenza rossa con la ritenzione della fluorescenza magenta i
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