Utilizzo di doppi strati lipidici supportati da perline per studiare l'output sinaptico dalle cellule T

Prendiamo i doppi strati lipidici supportati da perline, o BSLB, perle di silice rivestite con doppi strati lipidici coniugati con complessi peptidi-MHC antigenici, molecole di adesione e co-stimolatorie, che agiscono come cellule sintetiche presentanti l'antigene.

Incubare con cellule T.

I TCR si legano ai peptidi antigenici sui BSLB che, insieme ai segnali co-stimolatori, formano una sinapsi immunitaria, attivando le cellule T.

Questo legame innesca cascate di segnalazione intracellulare, inducendo il riarrangiamento dell'actina e formando microcluster nella sinapsi contenenti molecole di adesione e di segnalazione.

Le cellule T rilasciano vescicole transsinaptiche arricchite in TCR, molecole co-stimolatorie e contenuto di granuli litici nella sinapsi, legandosi ai BSLB.

Raffreddare gradualmente la co-coltura per separare i BSLB dalle cellule T.

Centrifugare ed eliminare il surnatante. Utilizzare un tampone contenente proteine per bloccare i siti di legame liberi sulle superfici.

Centrifugare e trattare BSLB e cellule T con anticorpi coniugati con fluorofori che si legano a specifiche molecole di segnalazione e co-stimolatorie.

Utilizzando la citometria a flusso, analizza i segna