JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 6:27 min. • July 8th, 2025
Prendiamo una coltura di macrofagi derivati dal midollo osseo. Rimuovere il terreno e aggiungere i batteri della Salmonella, che esprimono una proteina citoplasmatica fluorescente.
Centrifugare per facilitare il contatto batteri-macrofagi e incubare.
I batteri si legano ai recettori dei macrofagi, facilitando l'internalizzazione all'interno di un fagosoma.
Il fagosoma si fonde con vescicole derivate dall'endosoma e, contemporaneamente, i batteri secernono effettori, rimodellando il fagosoma in un vacuolo contenente Salmonella o SCV.
Un sottogruppo di SCV si rompe, rilasciando batteri internalizzati nel citoplasma.
Aggiungere un antibiotico per eliminare i batteri non internalizzati. Aspirare il terreno contenente batteri morti.
Introdurre un tampone contenente il detergente digitonina, che si lega al colesterolo.
Il legame della digitonina alla membrana plasmatica ricca di colesterolo provoca la formazione di pori, mentre la membrana SCV carente di colesterolo rimane intatta, un fenomeno chiamato permeabilizzazione differenziale.
Aggiungere anticorpi marcati in fluorescenza che entrano nelle cellule permeabilizzate per legare i batteri citosolici.
Utilizzare un detergente per lisar
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