Un saggio cellulare per l'identificazione di agenti che interagiscono con CXCR4

Prelevare una piastra multipozzetto rivestita di gelatina contenente cellule tumorali cerebrali umane aderenti che esprimono CXCR4.

Sostituire il terreno con un colorante sensibile al calcio. Le esterasi intracellulari scindono il colorante in un prodotto impermeabile alla membrana che si lega agli ioni calcio, mostrando una maggiore fluorescenza.

Rimuovere il colorante, lavare e aggiungere il tampone.

Posizionare la piastra in un lettore di micropiastre a fluorescenza con il composto che interagisce con CXCR4 e le piastre contenenti chemochine CXCL12.

Utilizzando parametri automatizzati impostati, iniettare concentrazioni crescenti di composti nei pozzetti di prova, seguite da una specifica concentrazione di CXCL12.

Nei pozzetti di controllo senza il composto, CXCL12 si lega a CXCR4.

Questo legame attiva una cascata di segnalazione, rilasciando ioni calcio nel citoplasma, dove si legano al colorante, intensificando la fluorescenza.

Tuttavia, nei pozzetti di prova, i composti interagenti inibiscono il legame di CXCL12 a CXCR4, influenzando la mobilizzazione del calcio e causando una diminuzione della fluorescenza dose-dipendente, confermandoli come antagonisti di CXCR4.

Il giorno d