Un test di attacco virale per lo screening di composti antivirali
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:47 min. • July 8th, 2025
Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente un monostrato di cellule di epatoma umano pre-raffreddato.
Trattare i pozzetti di prova con una miscela di virus dell'epatite C geneticamente modificato che trasporta il gene della luciferasi e un composto bersaglio; trattare i pozzetti di controllo con il solo virus.
Nei pozzetti di prova, le molecole bersaglio interagiscono con le glicoproteine virali e i recettori della superficie cellulare, impedendo l'adesione virale.
Tuttavia, nei pozzetti di controllo, le glicoproteine virali interagiscono con i recettori della superficie cellulare, consentendone l'attaccamento. Una bassa temperatura inibisce l'ingresso del virus.
Rimuovere il surnatante, introdurre un terreno e incubare nuovamente alla temperatura ottimale, facilitando l'ingresso virale.
All'ingresso, il virus rilascia il materiale genetico, avviando la sintesi delle proteine virali e degli enzimi luciferasi, che vengono secreti nel mezzo.
Trasferire il surnatante contenente luciferasi e introdurre un substrato.
L'interazione enzima-substrato produce luce in proporzione ai livelli di luciferasi.
La minore intensità luminosa nei pozzetti di prova, rispetto ai pozzetti di con
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