Un test per valutare l'effetto dei composti in esame sull'ingresso e la fusione virale nelle cellule ospiti

Prendi le cellule tumorali del fegato e incubale a bassa temperatura per compromettere l'endocitosi.

Introdurre un virus dell'epatite C ricombinante o HCV, comprendente un genoma di RNA ingegnerizzato che codifica per un reporter di luciferasi secreta.

Le lipoproteine virali interagiscono con i proteoglicani sulle cellule ospiti, mentre le glicoproteine dell'involucro virale si legano a specifici recettori dell'ospite.

In pozzetti selezionati, aggiungere il composto di prova che si lega alle glicoproteine virali.

Dopo l'incubazione a temperatura fisiologica, i virus legati vengono endocitizzati.

Scartare i virus non internalizzati, aggiungere un terreno di coltura e incubare.

Nei pozzetti non trattati, le glicoproteine aiutano la fusione dell'involucro virale e dell'endosoma, rilasciando il nucleocapside, mentre il mascheramento dei composti compromette la fusione nei pozzetti trattati.

Al momento del rilascio, l'RNA esprime proteine virali, tra cui la luciferasi che viene secreta extracellulare.

Raccogli il surnatante contenente luciferasi e aggiungi un substrato bioluminescente, che viene ossidato dalla luciferasi per emettere luce.

Una diminuzione della luminescenza nei pozzetti