JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:04 min. • July 8th, 2025
Inizia con un DNAzima che scinde l'RNA, un DNA catalitico che, legandosi a uno specifico biomarcatore batterico, viene attivato.
Il DNAzima è legato a una perlina magnetica rivestita di streptavidina tramite biotina alla sua estremità 5'. All'estremità 3', è legato a un'ureasi legata a oligonucleotidi, formando una perlina magnetica funzionale.
A un tubo contenente perline magnetiche funzionali, aggiungere un lisato di E. coli.
Uno specifico biomarcatore di E. coli dal lisato, attiva il DNAzima, innescando la scissione del legame RNA, causando il distacco del coniugato DNAzima-ureasi.
Utilizzare un supporto magnetico per immobilizzare le perle e rimuovere il coniugato DNAzyme-ureasi legato alle perline.
Trasferire il surnatante contenente ureasi rilasciato in un'altra provetta.
Aggiungere un colorante indicatore di pH, rosso fenolo, e una soluzione di urea.
L'ureasi idrolizza l'urea in ammoniaca e anidride carbonica.
L'ammoniaca, una base debole, aumenta il pH della soluzione, provocando un viraggio di colore, che indica la presenza del biomarcatore E. coli.
Dopo aver preparato le cellule di E. coli secondo il protocollo di testo, prelavare un tubo di microfuga da 1,5 millilitri ag
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