Un test su base molecolare per la quantificazione dei virus dell'influenza A e B
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:49 min. • July 8th, 2025
Prendi un sistema di rilevamento molecolare contenente un ricevitore di campioni preriempito, una cartuccia di trasferimento e una base di test.
La base del test ha provette di reazione contenenti primer T1 e T2 con siti di tacca e regioni di riconoscimento dell'influenza A e B, una miscela di enzimi e fari molecolari con un fluoroforo e un quencher.
Trasferire i campioni nasofaringei contenenti virus in un tampone di lisi dal ricevitore del campione alla base del test.
La lisi virale rilascia l'RNA, seguita dal legame del primer T2 alla regione bersaglio dell'RNA e dall'estensione mediante trascrittasi inversa.
L'altro primer T2 si lega allo stesso RNA, spostando il filamento inizialmente esteso.
Il primer T1 si lega al filamento spostato e la DNA polimerasi lo estende. Un enzima di nicking taglia il suo sito, con polimerizzazione e spostamento del filamento, formando DNA a doppio filamento.
Il processo continua, amplificando i duplex con sporgenze a singolo filamento.
I beacon molecolari interagiscono con le sporgenze, separando il fluoroforo dal quencher e producendo fluorescenza per quantificare l'influenza A e B.
Per iniziare il processo di test, toccare Esegui test sullo sche
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