JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
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Assumere piastre per microtitolazione contenenti un antibiotico aminoglicosidico diluito in serie. Una delle piastre contiene NTBC, un farmaco sintetico.
Introdurre Pseudomonas aeruginosa, un batterio gram-negativo, e incubare.
I batteri producono piomelanina – un pigmento extracellulare protettivo – nei pozzetti non trattati con NTBC, mentre il farmaco impedisce la produzione di piomelanina.
L'antibiotico cationico si lega ai lipopolisaccaridi anionici, o LPS, sulla membrana esterna batterica, spostando i ponti cationici e destabilizzando la membrana.
Entrando nei batteri, l'antibiotico si lega al sito amminoacilico, o sito A, nella subunità ribosomiale 30S.
L'antibiotico legato impedisce il legame con l'amminoacil-tRNA e il movimento ribosomiale attraverso l'mRNA, interferendo con la sintesi proteica e inibendo la crescita batterica.
Dopo l'incubazione, misurare la densità ottica della coltura per valutare la crescita batterica.
La concentrazione minima di antibiotico che impedisce la crescita batterica è la concentrazione inibitoria minima o MIC.
Valori di MIC simili per i pozzetti trattati con NTBC e non trattati con NTBC non indicano alcun impatto di NTBC sulla sensibilità agl
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