Un test per studiare l'impatto della rigidità della matrice extracellulare sull'infezione batterica

Prendi pozzetti contenenti idrogel di poliacrilammide di rigidità variabile ricoperti di collagene, che imitano una matrice extracellulare fisiologica o ECM.

Aggiungi cellule endoteliali microvascolari che formano aderenze focali, o FA - complessi che mediano il legame cellula-ECM - per rilevare la rigidità dell'idrogel.

Gli idrogel più rigidi aumentano l'espressione della vimentina, un componente del citoscheletro, sulla superficie cellulare, rispetto agli idrogel più morbidi.

Aggiungere il batterio Listeria monocytogenes, ingegnerizzato per esprimere una proteina fluorescente sotto il promotore della proteina che induce l'assemblaggio dell'actina, o ActA.

Centrifugare per sincronizzare il contatto batterico con le cellule ospiti e incubare.

I batteri si legano alla vimentina. Una maggiore presenza di vimentina sulle cellule ospiti più rigide legate all'idrogel porta a una maggiore aderenza batterica ed endocitosi.

Aggiungere un antibiotico, eliminando i batteri non internalizzati.

I batteri internalizzati secernono tossine, rompendo la membrana dell'endosoma. La fuga citoplasmatica attiva il promotore ActA per esprimere la proteina fluorescente, marcando i batteri intracellulari.