JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:24 min. • July 8th, 2025
Prelevare una piastra a più pozzetti con monostrati di cellule endoteliali umane aderenti su idrogel di poliacrilammide rivestiti di collagene di rigidità variabile.
Le cellule su idrogel più rigidi subiscono una significativa riorganizzazione citoscheletrica, aumentando la tensione intracellulare, rispetto agli idrogel più morbidi.
Lavare le cellule con terreni e aggiungere Listeria monocytogenes ingegnerizzata, che esprime una proteina fluorescente sotto il promotore della proteina che induce l'assemblaggio dell'actina (ActA).
Centrifuga per facilitare il contatto cellula-batteri. Incubare per mediare l'endocitosi batterica.
Lavare con mezzi leggeri. Trattare con gentamicina per eliminare i batteri non internalizzati. Incubare.
I batteri internalizzati rilasciano tossine che formano pori, distruggendo le membrane fagosomiali. I batteri citosolici sovraregolano l'espressione di ActA e della proteina fluorescente, marcando i batteri intracellulari.
Le proteine ActA inducono la polimerizzazione dell'actina, formando una coda di cometa di actina che spinge i batteri in avanti, causando l'internalizzazione da parte delle cellule vicine e promuovendo la disseminazione.
Dopo l'incubazio
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