Un test di utilizzo dell'ATP per determinare la sopravvivenza batterica in trattamento antibiotico
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:56 min. • July 8th, 2025
Inizia seminando una coltura batterica in una piastra di analisi. Quindi, incubare la piastra.
Le cellule batteriche hanno adesine superficiali e pili che consentono loro di aderire l'una all'altra, formando piccoli aggregati.
Aggiungere concentrazioni variabili di antibiotico ai pozzetti, lasciandone uno non trattato per un controllo.
Le molecole antibiotiche interagiscono con i batteri sensibili, influenzando la loro capacità di crescere e riprodursi, portandoli alla morte.
I batteri resistenti agli antibiotici rimangono metabolicamente attivi, producendo molecole di ATP.
Usa un sonicatore per distruggere le cellule batteriche, rilasciando il loro contenuto intracellulare, incluso l'ATP.
Aggiungere il reagente glow per l'utilizzo dell'ATP contenente luciferina, enzima luciferasi e altri cofattori.
La luciferasi utilizza l'ATP e l'ossigeno per convertire la luciferina in un'ossiluciferina eccitata.
L'ossiluciferina passa successivamente al suo stato fondamentale, emettendo luce luminescente.
Misurare l'assorbanza utilizzando un lettore di piastre.
La diminuzione dell'assorbanza a concentrazioni più elevate di antibiotici suggerisce una minore produzione di ATP, indicando un ridott
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici