Determinazione del ruolo delle cellule simili ai neutrofili nella sensibilità delle cellule di linfoma a un farmaco in esame

Prelevare una piastra a più pozzetti contenente monocolture sferoidi 3D di cellule di linfoma, globuli bianchi cancerosi e co-colture di cellule simili a linfomi e neutrofili in una matrice di membrana basale.

Aggiungi un farmaco di prova che si lega alla tubulina intracellulare e interrompe la polimerizzazione dei microtubuli, provocando l'apoptosi cellulare.

Nella co-coltura, il contatto diretto con le cellule del linfoma attiva le cellule simili ai neutrofili, inducendo la secrezione di citochine.

Queste citochine interagiscono con i recettori delle cellule del linfoma, innescando cascate di segnalazione a valle e sovraregolando l'espressione proteica anti-apoptotica, promuovendo la sopravvivenza cellulare.

Eliminare il supporto. Aggiungere un tampone di dissociazione per interrompere l'adesione cellulare.

Raschiare gli sferoidi e incubarli sotto agitazione. Trasferire la sospensione in provette e continuare l'agitazione per formare sospensioni unicellulari.

Introdurre un cocktail di anticorpi coniugati con fluorofori che marcano il linfoma e le cellule simili ai neutrofili.

Aggiungere l'annessina V marcata con fluoroforo e lo ioduro di propidio per marcare le cellule apoptotich