Un test per valutare l'immunodominanza nelle risposte citotossiche dei linfociti T

Iniziare con cellule bersaglio marcate con colorante fluorescente che presentano un epitopo peptidico non reattivo o epitopi peptidici derivati da antigeni tumorali con immunogenicità variabile.

Queste cellule mostrano intensità di fluorescenza variabili - bassa, intermedia e alta - corrispondenti alla presentazione di epitopi peptidici non reattivi, subdominanti e immunodominanti, rispettivamente.

Somministrare la sospensione cellulare per via endovenosa a un topo sensibilizzato.

Le cellule iniettate viaggiano verso la milza contenente popolazioni di cellule immunitarie, compresi i linfociti T citotossici o CTL.

All'interno della milza, i CTL interagiscono con gli epitopi delle cellule bersaglio.

Gli epitopi immunodominanti, essendo più immunogenici, innescano una robusta risposta immunitaria CTL, rilasciando sostanze citotossiche e provocando una lisi cellulare fluorescente ad alta intensità.

Raccogli la milza del topo e distruggila meccanicamente. Aggiungere un tampone di lisi per eliminare i globuli rossi e filtrare la sospensione.

Centrifugare e risospendere il pellet della cella.

Ordina le cellule utilizzando un selezionatore cellulare attivato dalla fluorescenza. La riduzion