Un test in vitro per valutare l'impatto immunomodulatorio dei monociti sulla proliferazione leucocitaria

Prelevare una piastra a più pozzetti con coltura di cellule staminali mesenchimali aderenti, o MSC.

Aggiungere cellule mononucleate del sangue periferico, o PBMC, e incubare.

Le MSC secernono il fattore di crescita degli epatociti, inducendo i monociti ad acquisire un fenotipo immunomodulatorio, producendo interleuchina-10, o IL-10.

Trasferire il surnatante contenente PBMC in una provetta.

Aggiungere perle magnetiche rivestite di anticorpo che si legano al marcatore di superficie del monocita CD14.

Utilizzare un separatore magnetico per isolare i monociti CD14+ e aggiungerli a pozzetti di piastre multipozzetto in concentrazioni crescenti.

Introdurre le cellule T CD4+ effettrici marcate con CFSE con colorante fluorescente.

Aggiungere microsfere coniugate con anticorpi che si legano specificamente ai marcatori di superficie delle cellule T CD3 e CD28, attivando le cellule.

Nei monociti di controllo ben carenti, le cellule T attivate proliferano, con ogni divisione cellulare che diminuisce l'intensità della fluorescenza CFSE nelle cellule figlie.

Tuttavia, nelle co-colture, i monociti indotti da MSC secernono IL-10, sopprimendo la proliferazione delle cellule T effettrici.

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