Un saggio di aderenza in fase solida per valutare la formazione di biofilm

Prendere una piastra a fondo piatto a più pozzetti con pozzetti contenenti batteri nei terreni di crescita o batteri nei terreni di crescita integrati con sale biliare.

I sali biliari inducono stress, causando danni cellulari e rilasciando DNA e proteine. Queste biomolecole rivestono il fondo dei pozzetti, consentendo ai batteri sopravvissuti di aderire alla superficie solida.

I batteri attaccati si moltiplicano, formando micro-colonie e producendo autoinduttori, o molecole di segnalazione chimica, che consentono la comunicazione batterica.

Questa comunicazione innesca i batteri a colonizzare e avviare la produzione di sostanze polimeriche extracellulari o EPS, generando un biofilm.

Dopo l'incubazione, rimuovere il terreno per eliminare i batteri che fluttuano liberamente.

Introdurre una colorazione cristallovioletta che interagisce con il peptidoglicano della parete cellulare batterica, conferendole un colore violaceo.

Rimuovere la macchia in eccesso e asciugare. Sovrapporre con etanolo per solubilizzare il cristallovioletto dalla parete cellulare batterica, cambiando il colore della soluzione.

Una colorazione più intensa nei pozzetti trattati con sali biliari rispetto ai pozzetti