Un saggio per studiare la formazione di biofilm indotta da sali biliari attraverso il rilevamento della matrice EPS

Prelevare una piastra multipozzetto contenente batteri enterici patogeni in un terreno di coltura.

Il terreno nei pozzetti selezionati contiene sali biliari – o molecole anfipatiche con attività simile a quella dei detergenti – che imitano le difficili condizioni di crescita.

I sali biliari distruggono la membrana batterica e causano danni al DNA e alle proteine.

Come contromeccanismo, i batteri formano un biofilm, una comunità batterica strutturata racchiusa in una matrice autoprodotta di sostanze polimeriche extracellulari, o EPS, contenente polisaccaridi, proteine, lipidi e acidi nucleici di origine microbica.

Lo strato di EPS protegge i batteri dall'esposizione ai sali biliari.

Dopo l'incubazione, aspirare il terreno per rimuovere i batteri che fluttuano liberamente.

Trattare con un tampone di fissazione per preservare l'architettura del biofilm e lavare per rimuovere il tampone in eccesso.

Aggiungere la concanavalina A marcata in modo fluorescente, una lectina che si lega ai polisaccaridi EPS, etichettando il biofilm. Lavare per rimuovere l'eccesso di Concanavalin A.

Utilizzando un lettore di piastre, misurare la fluorescenza. Una maggiore intensità di fluorescenza nei pozzett