Un metodo per la preparazione del campione per visualizzare i batteri che formano biofilm sulle ife fungine
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:37 min. • July 8th, 2025
Introdurre una colonia fungina legata al cellophane in una sospensione batterica marcata in fluorescenza. Rimuovere il cellophane e incubare.
Le cellule batteriche aderiscono alla superficie fungina attraverso molecole e recettori di superficie. I batteri aderenti secernono sostanze polimeriche extracellulari costituite da polisaccaridi, proteine e DNA, intrappolando le cellule batteriche e formando le fondamenta strutturali del biofilm.
Sciacquare la sezione in una soluzione salina forte per rimuovere i batteri legati in modo lasco
In un tampone fosfato, tagliare una sezione della colonia.
Trasferire la sezione in acqua sterile contenente agglutinina di germe di grano, o WGA legata a un colorante fluorescente rosso.
La WGA, una proteina vegetale, si lega ai residui di N-acetilglucosamina e acido sialico, consentendo al colorante attaccato di emettere fluorescenza sulla parete cellulare fungina.
Sciacquare la sezione in un tampone fosfato.
Immergere parzialmente un vetrino nel tampone. Lascia che la sezione galleggi su di essa. Sollevare delicatamente in modo che la sezione si stabilizzi senza interrompere il biofilm.
Posizionare un mezzo di montaggio, seguito da un vetrino copriog
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici