Analisi in tempo reale della migrazione delle cellule T residenti in diverse regioni tumorali mediante microscopia confocale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:23 min. • July 8th, 2025
Inizia con una fetta di tumore polmonare contenente cellule T residenti.
Le cellule T migrano attraverso il microambiente tumorale e interagiscono con le cellule tumorali e gli elementi stromali, svolgendo funzioni immunitarie.
La composizione del microambiente tumorale influenza fortemente lo spostamento e la velocità delle cellule T.
Aggiungi anticorpi accoppiati in fluorescenza distinti per marcare le cellule T, le cellule tumorali e gli elementi stromali nel microambiente.
Aggiungere DAPI, che infiltra le cellule con una membrana plasmatica danneggiata per colorare il nucleo, consentendo la visualizzazione delle regioni necrotiche all'interno del tumore.
Osservare il campione colorato al microscopio confocale.
Utilizzando una luce a fluorescenza adatta, selezionare una regione tumorale di interesse contenente cellule T residenti. Valutare la vitalità cellulare valutando le cellule DAPI-positive.
Per l'analisi in tempo reale, è possibile definire gli intervalli di tempo e il tempo totale di registrazione.
Per acquisire immagini z-stack, iniziare a una profondità inferiore alle cellule T etichettate e acquisire immagini a vari intervalli di tempo.
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