JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:37 min. • July 8th, 2025
Trattare colture neuronali con concentrazioni crescenti di una tossina di prova.
La tossina entra nelle cellule e viene rilasciata nel citosol.
A seconda del suo potenziale, la tossina può prevenire la fusione vescicolare, inibendo il rilascio di neurotrasmettitori.
Sostituire il terreno con un tampone contenente composti neurofarmacologici specifici per bloccare i potenziali d'azione neuronali.
Posizionare il piatto di coltura su un tavolino di elettrofisiologia. Per avviare la registrazione, collegare un neurone soma con una pipetta contenente un elettrodo di registrazione.
Applicare una pressione negativa costante per aspirare una piccola porzione della membrana, formando un gigaseal, una tenuta ermetica che garantisce un'interferenza minima durante la registrazione.
Mantenere una tensione di membrana costante per misurare le correnti neuronali.
Applicare impulsi di pressione negativa per rompere la membrana, stabilendo un contatto diretto tra il neurone e la pipetta.
Registra le correnti prodotte nel neurone a causa dell'assorbimento di neurotrasmettitori, chiamati mEPSC.
Una diminuzione della frequenza di mEPSC con l'aumento dell'esposizione alle tossine indica l'inibizione de
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