Un test per studiare l'impatto del trattamento fotodinamico con un fotosensibilizzatore sull'attività metabolica dei macrofagi

Prelevare una piastra multipozzetto contenente macrofagi aderenti.

Aggiungere un fotosensibilizzatore di prova diluito in serie ai pozzetti di prova. Il controllo ben manca del fotosensibilizzatore.

Incubare per l'assorbimento cellulare del fotosensibilizzante.

Esporre la lastra alla luce UV, chiamata trattamento fotodinamico, o PDT, per una durata specificata.

Nei pozzetti di prova, i fotosensibilizzatori all'interno dei macrofagi assorbono la luce UV e si eccitano.

Questi fotosensibilizzatori eccitati reagiscono con l'ossigeno molecolare, formando specie reattive dell'ossigeno, o ROS, e causando tossicità cellulare.

Per contrastare questo, gli enzimi antiossidanti cellulari, tra cui la superossido dismutasi e la catalasi, neutralizzano i ROS, prevenendo il danno ossidativo cellulare.

Aggiungere il reagente XTT, un sale di tetrazolio e un reagente di accoppiamento elettronico sia per testare che per controllare i pozzetti. Incubare.

Nelle cellule metabolicamente attive, il sistema di trasporto degli elettroni della membrana transplasmatica trasferisce gli elettroni dal NADH mitocondriale al reagente di accoppiamento elettrone, riducendo l'XTT a un prodotto di formazano arancione.