L'effetto dell'aspirina e dell'ibuprofane sulla capacità fagocitaria dei macrofagi

Inizia con una sospensione fungina di Cryptococcus. Aggiungere una soluzione di bioparticelle di derivazione fungina coniugate con un colorante fluorescente sensibile al pH per colorare le cellule di Cryptococcus.

Lavare per rimuovere la tintura non legata. Trasferire la sospensione fungina colorata in una piastra a più pozzetti con macrofagi aderenti o cellule immunitarie fagocitiche.

Introdurre la concentrazione inibitoria minima di un farmaco, come l'aspirina o l'ibuprofene, e incubare per facilitare l'assorbimento del farmaco.

Le molecole del farmaco interagiscono con la cicloossigenasi-2, un enzima che sintetizza le prostaglandine, inibendone l'attività.

Ciò impedisce la conversione dell'acido arachidonico in prostaglandina, preservando i livelli intracellulari di cAMP e migliorando la capacità fagocitaria dei macrofagi, facilitando l'internalizzazione dei funghi.

Il fagosoma contenente funghi si fonde con il lisosoma, un organello acido, formando un fagolisosoma con un pH acido e permettendo al colorante di diventare fluorescente.

Le cellule trattate con farmaci mostrano una fluorescenza più elevata rispetto alle cellule non trattate, suggerendo l'efficacia del farmaco nel migliorare la capacità fagocitaria dei macrofagi.

Iniziare con una coltura della linea cellulare di macrofagi murini, coltivata in terreno RPMI 1640 completo, come descritto nel protocollo di testo.

Inoltre, preparare una coltura di Cryptococcus neoformans risospesa in PBS alla concentrazione desiderata, come indicato nel protocollo di testo.

Per colorare le cellule criptococciche con la colorazione della fagocitosi, erogare 999 microlitri di cellule in una provetta da microcentrifuga. Aggiungere 1 microlitro di macchia al tubo. Incubare le cellule per 1 ora a temperatura ambiente, al buio, con lenta agitazione.

Dopo l'incubazione, lavare le cellule mediante prima centrifugazione. Quindi, scartare il surnatante. Risospendere le celle con PBS e ripetere la fase di lavaggio altre due volte.

Erogare 100 microlitri della sospensione cellulare di Cryptococcus neoformans nei pozzetti della piastra a 96 pozzetti contenente i macrofagi in coltura.

Per studiare l'effetto dei farmaci in esame sulla fagocitosi dei macrofagi, erogare 100 microlitri del farmaco in esame desiderato in pozzetti appropriati della piastra a 96 pozzetti come descritto nel protocollo di testo.

Incubare la piastra in un incubatore ad anidride carbonica per 2-6 ore. Al termine dell'incubazione, misurare la fluorescenza dalla colorazione fagocitaria.