JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:50 min. • January 15th, 2026
Inizia con una provetta contenente neutrofili. Aggiungere un tampone contenente un inibitore della proteinasi per prevenire la degradazione delle proteine.
Aggiungere un detergente adatto per permeabilizzare la membrana neutrofila
In un bagno di ghiaccio, sonicare il campione con onde sonore ad alta frequenza per interrompere la membrana cellulare, rilasciando contenuti intracellulari, comprese varie proteine.
Centrifugare brevemente per raccogliere il contenuto dalle pareti della provetta e trasferirlo in una provetta adatta.
Introdurre un agente riducente e incubare ad alta temperatura per promuovere la scissione del legame disolfuro, provocando la denatura delle proteine.
Raffreddare e introdurre un reagente alchilante che alchilizza i gruppi sulfidrilici.
Aggiungere acetone freddo per indurre la precipitazione delle proteine.
Centrifuga per pellettare le proteine e i frammenti cellulari. Rimuovere il surnatante e asciugare all'aria.
Introdurre un tampone contenente agente denaturante e sonicare per risolubilizzare il pellet proteico.
Infine, aggiungi una miscela di proteasi che scinde le proteine. Conservare il campione per un'ulteriore elaborazione.
Per iniziare, raccogliere l
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