JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:43 min. • January 15th, 2026
Prendi una STop And Go Extraction o STAGE Tip, una colonna di purificazione miniaturizzata.
La punta contiene piccole perle di silice legate a lunghe catene di idrocarburi per la purificazione dei peptidi basata sull'interazione idrofobica.
Lavare con tamponi contenenti un'alta percentuale di acetonitrile, rimuovendo le impurità della resina.
Introdurre un tampone legante e centrifugare, equilibrando la colonna per un legame ottimale dei peptidi.
Caricare un campione di peptidi predigerito ottenuto da cellule differenziate simili a neutrofili, contenente frammenti peptidici e impurità, compresi i sali.
Centrifugare per far passare il campione attraverso la colonna. I frammenti peptidici si legano alle catene idrocarburiche attraverso interazioni idrofobiche, mentre i sali vengono rimossi.
Aggiungere il tampone legante e centrifugare, rimuovendo le impurità rimanenti.
Introdurre il tampone ad alto contenuto di acetonitrile per l'eluizione.
Utilizzando una siringa, far passare il tampone attraverso la colonna. L'acetonitrile si lega alle catene idrocarburiche, sostituendo i frammenti peptidici che eluiscono con il tampone.
Eseguire la profilazione proteomica per identificare i peptid
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