Valutazione degli anticorpi neutralizzanti funzionali SARS-CoV-2

Inizia con siero umano diluito in serie contenente concentrazioni variabili di anticorpi neutralizzanti contro la sindrome respiratoria acuta grave coronavirus 2 o SARS-CoV-2.

Introdurre virus pseudotipizzati con luciferasi RNA, integrasi e trascrittasi inversa, incapsulati all'interno di un doppio strato lipidico contenente proteine spike di SARS-CoV-2.

Gli anticorpi neutralizzano i virus in base alla diluizione del siero, con diluizioni più basse che mostrano la massima neutralizzazione.

Introdurre cellule bersaglio che esprimono recettori dell'enzima-2 di conversione dell'angiotensina o recettori ACE2 e proteasi transmembrana serina-2 o TMPRSS2.

In diluizioni di siero più elevate, i virus non neutralizzati interagiscono con i recettori ACE2, mentre TMPRSS2 sfalda la proteina spike, consentendo la fusione del virus.

All'ingresso, l'RNA della luciferasi viene trascritto inversamente nel DNA che si integra nel genoma dell'ospite e produce l'enzima luciferasi.

Sostituire il terreno con un tampone di analisi contenente un substrato di luciferasi e un agente lisingante.

Le cellule lisano, rilasciando luciferasi intracellulare, che interagisce con il substrato e produce un'elevata lumi