Isolamento di cellule T Natural Killer invarianti da un modello murino
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:35 min. • July 8th, 2025
Inizia iniettando per via intraperitoneale un glicolipide sintetico in un topo.
Le cellule presentanti l'antigene, o APC, internalizzano il glicolipide e lo presentano attraverso la molecola MHC non classica CD1d.
Le APC migrano verso la milza e interagiscono con le cellule T natural killer invarianti o cellule iNKT, inducendo l'attivazione e la proliferazione delle cellule iNKT.
Raccogli la milza. Dissociarlo meccanicamente per generare una sospensione a cella singola.
Trasferire le cellule in una provetta. Aggiungere un terreno di gradiente di densità e centrifugare per separare i linfociti.
Raccogli i linfociti. Aggiungere tetrameri CD1d marcati con fluorofori caricati con antigene glicolipidico che interagiscono con le cellule iNKT.
Rimuovere i tetrameri non legati. Sovrapposizione con microsfere magnetiche che si legano ai fluorofori legati ai tetrameri.
Rimuovere le perline non legate e caricare la sospensione della cella su una colonna magnetica.
Sotto il campo magnetico, le cellule iNKT legate a perline vengono trattenute nella colonna mentre le celle rimanenti scorrono attraverso.
Rimuovere la colonna dal campo magnetico. Aggiungere un tampone di eluizione per eluire le ce
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