Una tecnica ex vivo per produrre cellule T del recettore dell'antigene chimerico
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:38 min. • July 8th, 2025
Prelevare le cellule T primarie, mescolate con perle magnetiche coniugate con anticorpi in un terreno integrato con interleuchina-2, e incubarle.
Gli anticorpi si legano al CD3 nel complesso del recettore delle cellule T e al recettore co-stimolatore CD28, mentre l'interleuchina-2 si lega al suo recettore affine, causando l'attivazione e la proliferazione delle cellule T.
Introdurre vettori lentivirali con un RNA transgenico che codifica per un recettore chimerico dell'antigene o CAR e incubare.
Dopo la fusione della membrana vettore-cellula, l'RNA virale subisce la trascrizione inversa in DNA, integrandosi nel genoma ospite.
Le cellule T trasdotte esprimono CAR legate alla superficie.
Raccogli le cellule a intervalli definiti.
Per la crioconservazione, prelevare un'aliquota di cellule, staccare le perle legate mediante pipettaggio e separarle magneticamente.
Centrifugare le cellule e risospenderle in un mezzo di crioconservazione.
Congelare le cellule e conservarle a temperatura criogenica.
Per valutare l'espressione di CAR, prendere un'altra aliquota di cellule, far girare le cellule e risospenderle in un tampone.
Introdurre un anticorpo fluorescente specifico per CAR e rilevare
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