Fotoimmunoterapia nel vicino infrarosso per l'eliminazione mirata delle cellule in colture 3D miste

Prendiamo una coltura di sferoidi misti a goccia sospesa, che sono aggregati cellulari eterogenei costituiti da cellule bersaglio che esprimono recettori per i fattori di crescita e una proteina fluorescente, mentre le cellule non bersaglio esprimono una proteina fluorescente di colore diverso.

Sostituire i terreni con un coniugato anticorpo-fotoassorbitore comprendente un anticorpo monoclonale specifico per la cellula bersaglio e un colorante fotoassorbente.

Incubare per facilitare il legame degli anticorpi ai recettori delle cellule bersaglio.

Lavare gli sferoidi con un terreno per rimuovere i coniugati non legati, quindi trasferirli in un piatto con fondo di vetro con terreno per l'irradiazione della luce.

Esporre gli sferoidi alla luce del vicino infrarosso per la fotoimmunoterapia, innescando una reazione fotochimica del colorante fotoassorbente sulle cellule bersaglio, causando un rapido danno alla membrana cellulare e la morte cellulare.

Questo processo elimina le cellule bersaglio senza danneggiare le cellule non bersaglio.

Trasferisci gli sferoidi su una nuova piastra di caduta appesa. Aggiungere il terreno e incubare per la crescita degli sferoidi.

Al microscopio a fluore