Isolamento delle cellule staminali ematopoietiche del sangue del cordone ombelicale per generare topi del sistema immunitario umano
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:23 min. • July 8th, 2025
Inizia con le cellule del sangue del cordone ombelicale umano, comprese le cellule staminali ematopoietiche CD34+ o HSC.
Aggiungere anticorpi per bloccare i recettori Fc cellulari, impedendo il legame non specifico delle microsfere magnetiche specifiche per le HSC.
Introdurre le microsfere magnetiche rivestite di anticorpi che hanno come bersaglio le HSC CD34+. Centrifugare e scartare il surnatante.
Risospendere le celle in un buffer. Passarli attraverso un separatore magnetico per trattenere le HSC legate a perline; Le cellule non legate scorrono attraverso.
Rimuovere il campo magnetico per raccogliere le HSC.
Centrifugare e risospendere le cellule in un mezzo di crescita. Placcare le cellule e incubarle.
Il terreno contiene fattori di crescita e citochine che promuovono la sopravvivenza e l'espansione delle HSC.
Raccogli le cellule. Aggiungere un mezzo di congelamento, trasferire in un crioviale e congelare.
Per generare un modello murino del sistema immunitario umano, o HIS, scongelare le HSC. Aggiungerle a un mezzo preriscaldato.
Centrifugare e risospendere le cellule in un tampone.
Le cellule sono pronte per l'iniezione in un cucciolo di topo immunodeficiente per la generazion
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici