JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:44 min. • July 8th, 2025
Prendi due cuvette per elettroporazione. Una cuvetta contiene un piccolo RNA interferente, o siRNA, progettato per inibire la produzione di FIP200, una proteina che induce l'autofagia.
La seconda cuvetta contiene un siRNA criptato come controllo che non inibisce la produzione di FIP200.
Aggiungere cellule dendritiche immature, o iDC, elettroporare per l'ingresso cellulare di siRNA e quindi placcare le cellule.
Il siRNA internalizzato si lega a un complesso di silenziamento che induce l'RNA.
Il complesso con il siRNA specifico per FIP200 scinde il suo mRNA bersaglio, inibendo la produzione di FIP200, mentre le iDC trattate con siRNA di controllo producono FIP200.
Raccogli le cellule e aggiungi il virus dell'herpes simplex. Dopo la fusione virale della membrana dell'involucro cellulare, il DNA rilasciato entra nel nucleo e porta alla produzione di proteine virali e nucleocapsidi.
Le proteine virali distruggono le lamine nucleari. FIP200 forma un complesso che innesca una cascata di segnalazione, inducendo l'autofagia delle lamine interrotte per bersagliarle per la degradazione e facilitando la fuga dei nucleocapsidi virali nel citoplasma.
L'inibizione mediata da siRNA della produzion
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