JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:42 min. • July 8th, 2025
Prendiamo i vettori retrovirali mescolati con le cellule primarie della milza.
I vettori contengono RNA transgenico che codifica per un recettore chimerico dell'antigene o CAR, che prende di mira un antigene specifico del tumore.
La citochina interleuchina-2 nel terreno promuove selettivamente la proliferazione delle cellule T mentre le altre cellule alla fine muoiono.
Trasferire la miscela in una micropiastra rivestita con frammenti di fibronectina ricombinante.
Centrifugare per facilitare i frammenti di fibronectina che legano i vettori e le cellule T, mediando l'interazione virus-cellula ospite, e incubare.
Dopo la fusione dell'involucro dei vettori con la membrana cellulare, gli enzimi virali trascrivono l'RNA rilasciato in DNA e lo incorporano nel genoma ospite.
Le cellule T trasdotte esprimono CAR legate alla superficie, costituite da un frammento variabile di anticorpo extracellulare che ha come bersaglio l'antigene specifico del tumore e le regioni di segnalazione intracellulare per rispondere all'antigene.
Risospendere le cellule prima di trasferirle in una provetta.
Centrifugare per scartare il surnatante contenente virus non internalizzati e risospendere le cellule in un
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