Un modello murino di interposizione aortica per studiare il rigetto vascolare indotto da alloimmunitarie

Preparare un topo donatore anestetizzato e posizionarlo in posizione supina. Praticare un'incisione sulla linea mediana per esporre la cavità addominale.

Esternalizzare l'intestino per localizzare l'aorta addominale infrarenale o IAA sotto le arterie renali, trasportando il sangue ossigenato.

Separare l'IAA dalla vena cava inferiore adiacente, che trasporta sangue deossigenato.

Legare i piccoli rami vicino all'IAA e bloccare l'IAA per ostruire il flusso sanguigno.

Resecare un segmento di lunghezza appropriata e posizionarlo in soluzione salina.

Ripetere la procedura con un topo ricevente di un diverso background genetico.

Impiantare l'IAA del donatore all'interno del ricevente, in modo che corrisponda al suo orientamento anatomico.

Eseguire anastomosi end-to-end suturando le estremità dell'innesto del donatore alle estremità del ricevente.

Rilasciare i morsetti e verificare il normale flusso sanguigno senza perdite. Rimetti l'intestino nella cavità addominale. Quindi, suturare il sito di incisione.

Il modello è ora pronto per studiare le risposte immunitarie contro l'innesto di IAA trapiantato.

Inizia posizionando il topo donatore in posizione supina su una tavola di plexiglas pulita e sottile avvolta in un telo sterile sotto il microscopio operatorio con un ingrandimento 8-30X.

Dopo aver confermato un'adeguata anestesia chirurgica con il pizzicamento delle dita, utilizzare le forbici sterili per praticare un'unica incisione sulla linea mediana dal pube al processo xifoideo. Quindi, usa un piccolo divaricatore per aprire le pareti addominali, esponendo la cavità addominale. Quindi, utilizzare applicatori sterili con punta di cotone per ritrarre delicatamente l'intestino superiormente alla sinistra dell'animale. Coprire il tessuto con una garza inumidita con soluzione fisiologica e muovere gli organi riproduttivi inferiormente per localizzare l'aorta infrarenale e la vena cava inferiore o IVC.

Ora, usa la pinza medica numero 5 per separare l'aorta dall'IVC nell'arteria renale sinistra vicino alla biforcazione. Quindi, utilizzare suture monofilamento di poliammide 10-0 per legare i piccoli rami vicino all'aorta. Quando l'aorta del donatore e l'IVC sono stati separati, saturare il vaso con soluzione fisiologica. Coprire la cavità esposta con una garza inumidita e mettere da parte il donatore in un'area sterile.

Ora, posiziona il topo ricevente al microscopio e separa l'aorta ricevente dall'IVC come appena dimostrato. Quindi, posizionare due pinze microvascolari da 4 millimetri prossimali e distali al segmento di interesse a circa 5 millimetri di distanza. Successivamente, utilizzando le microforbici di Vannas-Tübingen, eseguire una singola aortotomia orizzontale e resecare non più di 0,5 millimetri dell'aorta addominale per accogliere l'innesto aortico del donatore.

Rimettere il donatore al microscopio e sezionare un segmento di innesto da 3 a 4 millimetri come appena dimostrato. Allora. Utilizzare un ago calibro 25 5/8 per lavare l'aorta asportata con soluzione fisiologica eparinizzata, facendo attenzione che la punta dell'ago non venga a contatto con il vaso, e posizionare il vaso in un contenitore di soluzione fisiologica eparinizzata su ghiaccio.

Entro 30 minuti dall'escissione, posizionare l'innesto aortico del donatore in posizione ortotopica nel ricevente, facendo corrispondere il rispettivo orientamento anatomico dell'innesto con quello del ricevente. Quindi, afferrare delicatamente la tunica esterna del vaso e utilizzare la pinza numero 5 per capovolgerla leggermente. Ora, usa la pinza per guidare un ago attaccato a una sutura monofilamento di poliammide 10-0 attraverso l'intero spessore della parete del vaso per fissare l'innesto aortico del donatore al vaso resecato del ricevente.

Per il posizionamento di punti continui, posizionare le suture di stazionamento a ore 9 sia nell'estremità superiore che in quella inferiore dell'innesto. Quindi, partendo dall'estremità superiore dell'innesto a partire dalle ore 3, anastomizzare le estremità resecate con due suture in esecuzione e fissare la sutura alla sutura di sostegno. Quindi, capovolgere l'innesto e continuare la sutura in esecuzione fino alla parte dorsale del vaso, incontrando la sutura di sostegno di origine. Fissare la sutura senza esercitare molta pressione sul vaso e ripetere la sutura per l'anastomosi inferiore.

Una volta completata l'anastomosi, rilasciare il morsetto microvascolare distale per consentire il flusso sanguigno retrogrado attraverso il vaso. Se non si osserva sanguinamento, rilasciare la pinza prossimale. Se non si osservano ostruzioni di sangue, utilizzare un paio di pinze per afferrare delicatamente un'estremità delle suture di stazionamento e allontanare leggermente il vaso per ispezionare la parete posteriore del vaso. Non si devono osservare arricciature. Se si osserva un modello di polso vigoroso sia nel vaso donatore che in quello ricevente, utilizzare applicatori con punta di cotone per riportare l'intestino nella cavità addominale.

Infine, utilizzare un porta-aghi e una pinza Graefe per chiudere la parete addominale con suture in polipropilene 5-0 e cuciture continue. Utilizzando una chiusura sottocuticolare, chiudere lo strato cutaneo con le stesse suture. La funzione motoria degli arti posteriori può essere osservata per valutare il successo dell'intervento.