Generazione di virus influenzali vivi attenuati ricombinanti per vaccini

Iniziare con plasmidi bidirezionali che trasportano cDNA che codificano alcune proteine virali essenziali di un ceppo influenzale adattato al freddo.

Introdurre un nuovo set di plasmidi bidirezionali contenenti emoagglutinina e cDNA modificato della neuraminidasi di un diverso ceppo influenzale.

Introdurre un reagente di trasfezione in questa miscela e incubare per formare un complesso con i plasmidi.

Trasferisci questi complessi su cellule epiteliali umane in coltura per consentire l'ingresso del plasmide nella cellula.

I plasmidi bidirezionali con due promotori in orientamenti opposti consentono la produzione di proteine virali e del loro RNA corrispondente.

Incubare le cellule a una temperatura più bassa.

Le proteine virali e gli RNA virali si autoassemblano per formare virus influenzali ricombinanti adattati al freddo con replicazione ridotta in condizioni più calde.

Sovrapposizione con cellule MDCK che sovraesprimono acido sialico ed enzimi tripsina modificati che consentono l'adesione e l'ingresso virale all'interno delle cellule.

Incubare alla stessa temperatura per indurre la replicazione e la produzione di nuovi virus.

Centrifugare e raccogliere i virus influenzali vivi at