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Immunologia
0 visualizzazioni • 3:33 min • July 8th, 2025
Inizia con un topo trattenuto privo di interleuchina-10, una citochina antinfiammatoria, che provoca infiammazione del colon.
Prendi una siringa riempita con una sospensione fecale ricca di diversi microbi intestinali, da un topo sano.
Quindi, collegare un tubo orale alla siringa.
Inserire questo tubo nella bocca, guidandolo verso il basso fino allo stomaco del topo.
Ora, somministrare la sospensione fecale direttamente nello stomaco, permettendole di raggiungere gradualmente il colon.
Una volta nel colon, i microbi fecali si moltiplicano e colonizzano, ristabilendo i microbi intestinali.
I microbi colonizzati rilasciano quindi vari metaboliti secondari.
Questi metaboliti aiutano nella produzione di mucina, che ripara l'epitelio del colon e ripristina l'integrità intestinale.
All'interno dell'epitelio del colon, i microbi fecali e i loro metaboliti interagiscono con le cellule immunitarie.
Questa interazione fa sì che le cellule immunitarie rilascino citochine antinfiammatorie, portando a una riduzione dell'infiammazione del colon nel topo carente di interleuchina-10.
Preparare una soluzione sterile aggiungendo una soluzione di glicerolo al 10% alla soluzione fisiologica. Aggiungere 10 millilitri di questa soluzione al tubo conico per ogni grammo di pellet fecale. Omogeneizzare questa miscela a bassa velocità tre volte per 30 secondi, utilizzando un omogeneizzatore da banco all'interno di una cappa aspirante per risospendere le feci. Filtrare la sospensione fecale attraverso due strati di garza di cotone sterile. Conservare temporaneamente il filtrato in frigorifero per un massimo di sei ore, oppure confezionarlo in fiale criogeniche sterili e conservarlo in un congelatore a meno 80 gradi.
Pulire accuratamente l'omogeneizzatore o il frullatore seguendo una procedura standard. Scongelare la sospensione fecale congelata con ghiaccio se si utilizzano campioni congelati. Mescolare la sospensione fecale scongelata mediante vortex. Trasferire la sospensione fecale fresca o scongelata in siringhe da 1 millilitro. Pesare i topi e scegliere la giusta dimensione dell'ago della sonda e il volume massimo di dosaggio.
Testare l'ago della sonda gastrica misurando la lunghezza dalla punta del naso del topo alla parte inferiore dello sterno. Riempire la siringa con glicerolo al 10% in soluzione salina o fecale e rimuovere le bolle d'aria all'interno della siringa e dell'ago. Posizionare una gabbia per mouse nell'armadio di biosicurezza, rimuovere il coperchio della gabbia di plastica e lasciare il rack di metallo in posizione.
Aprire la rastrelliera metallica con una mano. Afferra un mouse per la coda e mettilo sulla rastrelliera di metallo. Tieni il mouse per la coda con una mano e usa il pollice e il medio di un'altra mano per trattenere l'animale afferrando la pelle sopra le spalle. Estendi delicatamente la testa dell'animale all'indietro e tieni la testa in posizione con una mano. Posiziona l'ago della sonda gastrica sopra la lingua all'interno della bocca.
Avanzare delicatamente lungo il palato superiore fino a quando l'ago raggiunge l'esofago. Passa l'ago senza intoppi in un solo movimento. Una volta che l'ago è posizionato e verificato correttamente, somministrare lentamente il materiale spingendo la siringa attaccata all'ago. Dopo il dosaggio, estrarre delicatamente l'ago. Segna il topo e rimettilo nella sua gabbia di casa. Monitora l'animale per 5-10 minuti cercando segni di respiro affannoso o angoscia. Monitorare nuovamente i topi tra le 12 e le 24 ore dopo il trapianto di microbiota fecale.