Un test in vitro per valutare l'attività antitumorale delle cellule CAR T specifiche del tumore

Prelevare una piastra multipozzetto contenente cellule tumorali di linfoma a cellule B che esprimono un antigene di superficie specifico per le cellule B e un enzima luciferasi citoplasmatico.

Introdurre le cellule T CAR in pozzetti selezionati e incubare. Le cellule esprimono recettori chimerici dell'antigene, o CAR, che comprendono un dominio extracellulare che prende di mira l'antigene tumorale e domini di segnalazione intracellulare.

Il CAR si lega all'antigene tumorale, inducendo l'attivazione delle cellule T CAR.

Le cellule attivate rilasciano citochine che promuovono l'attività antitumorale delle cellule, innescando il rilascio di tossine.

Le tossine entrano nelle cellule tumorali e inducono la morte cellulare.

Centrifugare le cellule e isolare il surnatante. Quantificare le citochine per valutare l'attività delle cellule CAR T.

Risospendere le cellule in un tampone contenente luciferina, un substrato bioluminescente.

All'ingresso, la luciferina viene ossidata dalla luciferasi nelle cellule tumorali viventi, emettendo luce.

Misurare la bioluminescenza per identificare una diminuzione del segnale nelle cellule tumorali trattate, confermando la citotossicità mediata dalle cell